Nat Neurosci:对小鼠,非人类灵长类动物和人类中功能有所不同的中间神经元进行病毒操作

2021-11-29 06:41:50 来源:
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大规模的转录组学术研究准备急剧推断出在特定细胞内类别中的无论如何表达与脊髓思维病因相关的基因组。了解和外科手术这些病因的分析方法将必须载体和操纵特定轴突亚型的分析方法。因此,在非本能类人猿和本能中的接触这些人群已来得至关重要。私营化黏液相关病原(rAAVs)是在脊髓组织中的同步进行基因组传递的众所周知分析方法,对特定的轴突群体没有内在的软性。系统会的减弱子推测并未通过必需以单细胞内亮度同步进行转录组和密切相关表型学术研究的关键技术的最新发展而获取较快。但对于减弱子选择的搜索空间仍然很大。为了集中的我们的减弱子选择,所作选择最初学术研究Scn1a的抑制态势,Scn1a是在不同轴突群体中的表达的基因组,其破坏与严重的中风病相关。为基础用以交叉交叉染色质测序(scATAC-seq)统计数据的单细胞内测出与串连鸟类的核酸排斥性相为基础,所作在该基因组邻近提名了十个候选抑制核酸。所作确认了三种减弱子,合作载体表达Scn1a的轴突群体的广度。其中的,一种特定的较长抑制核酸能够将病原表达限制为表达PV的大脑中的间轴突(PV cIN)。

分析方法:四名受试者(两名未成年/两名异性恋,平均年龄22-57岁)接受了一项外科开刀,切除了小脑组织(脑部和天鹅体)以外科手术脑膜炎中风。在所有的病例中的,每个与会者都曾接受过一次初步的开刀,置于硬膜下和/或广度电容同步进行颅内监测,以确认中风中风的右边。从天鹅和脑部自取300μm切开,在天鹅切开中的,病原的载体是管壁亚区。在接种病原后7~14d对培育的人切开同步进行电生理记录。将培育的人切开转移到记录楼内。对固有膜和放电特性同步进行分析。鼠类分别保持在17.8–26.1℃和30–70%的宏观环境温度和湿度以外。这些参数被密切监测和控制在野猫聚居楼内。从普林斯顿大学(MIT)的群体中的获取了一只雌性一般而言狨兔(6岁左右)。成年(2岁)雄性猕兔(macacamulatta)来自南康奈尔大学戴维斯分校的南加州国内类人猿学术研究中的心。在小鼠脑切开探头(Zivic Instruments)上同步进行冠状切开,并在冰冷的人工脑脊髓盐酸(ACSF)中的解剖V1大脑。经过处理后,运用于运用于Nova-Seq S2 100重复试剂盒(Illumina)同步进行测序。

结果:在较长时间或病理发展只能(包括Dret综合征)安全检查回路成熟的早期动态的主要心理障碍是,在不运用于转基因组动物的只能无法转回特定的细胞内类别。即使运用于复杂的表型策略性,年轻的PV cIN也很难视作表型物质。考虑到它们的总质量(它们代表所有中枢神经cIN的40%)并且显现出得相比较较晚。更广泛地说,在本学术研究中的确认的减弱子发放了具有特殊临床意义的轴突群体的回访除此以外。最微小的是,这些减弱剂可以通过基因组替代疗法或抑制轴突活性而潜在地用以加大Dret综合征的衰弱症状。所作说明了均匀分布和全身针头可用以理论上的病原传递到小脑。通过均匀分布针头,有可能改善局灶性中风,PFC功能心理障碍或天鹅知觉心理障碍。相比之下,系统会性引入病原可用以必须全面干预的只能,例如,不对某种程度中风中风或思维病和脊髓的有病因。所作的学术研究表明,对抑制锕系元素的宽松鉴定为外科手术环境中的特定细胞内类别的获自取发放了路线图。重要的是,说明了我们的减弱子选择分析方法可推广到其他基因组。总体而言,我们推测了一组七个针对不同轴突群体和中的枢脊髓组织周边具有独特特异性的减弱剂。即使运用于了宽松的基准(对前提人群的软性> 90%),我们的分析方法仍具有显着的成功率(> 20%)。此外,正如高度排斥的核酸所计算的那样,所作测试的减弱子集在包括本能在内的所有鸟类中的被推论具有同等的软性和理论上性。

Vormstein-Schneider, D., Lin, J.D., Pelkey, K.A. et al. Viral manipulation of functionally distinct interneurons in mice, non-human primates and humans. Nat Neurosci (2020).

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